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发布日期:2024/9/5 10:34:00

实验背景

裸鼠成瘤实验,是一种用于研究肿瘤发生和发展的动物实验。通过裸鼠成瘤实验,可以研究肿瘤细胞在体内的生长、转移、药物治疗等方面的情况,为开发新的肿瘤治疗方法和药物提供重要的实验数据。

 

 

实验优点

①让一群裸鼠带有相同肿瘤,生长速率大致相同,个体差异较小,存活率高。 

②可连续移植,肿瘤能长期保留。 

③实验周期较短,实验条件易于控制。 

④对宿主的影响类似,可以客观判断疗效。

 

鼠的品系选择

实验常用的是BALB/c-nu裸小鼠,因其无胸腺,T—淋巴细胞缺陷,抵抗力低下,常因消耗性疾病而死亡,更宜在SPF环境内饲养。裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面,有着特殊的价值。 实验通过在体内移植外源性肿瘤细胞后,由于其免疫系统的不完整,不会对异物产生免疫反应,因此,肿瘤细胞可以不受抵抗地存活和生长。 随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加,故接种肿瘤实验一般会采用4-6周龄的裸鼠。

 

 

实验过程

本文以皮下荷瘤实验为例,将细胞或组织通过原位或皮下移植到裸鼠体内,使其成瘤。

细胞准备

细胞系选择:不同的细胞成瘤能力不同,考虑细胞成瘤能力和实验目的,鼠源细胞易成瘤,人源细胞更贴近人类肿瘤。

细胞复苏与扩增:取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增,确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态,一般鼠源细胞:2-100万/只;人源细胞:200-1000万/只。 最高注射量:结合细胞和裸鼠的实际情况,最高注射1000万/0.1ml,避免细胞过饱和。

接种步骤

①胰酶消化细胞,计数后将其重悬于生理盐水中 。

②选择进针部位(一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位),用酒精棉球擦拭。

③向前方穿行,注射前针头左右动一下,若无阻力则证明在皮下,否则可能在皮内或肌肉里面 。

④缓慢推注,一般体积为100-200μL,注射完后缓慢拔出针头,可在注射部位看到明显的鼓包 。

⑤接种点离进针点尽量远一些,防止漏液和污染。

接种后流程

接种后观察(肿瘤)→成瘤后肿瘤测量→按方案给药

 

结果处理

一般一周到两周即可观察到是否成瘤。成瘤成功后,根据客户要求定期测量,汇集数据,绘制肿瘤生长曲线。实验结束后处死裸鼠,取出肿瘤,拍照(注意光线,对焦清晰,放置直尺摆放整齐,用于计算肿瘤体积,制作带有各肿瘤体积的EXCEL表)。

 

常见问题

肿瘤长不出来是怎么回事? 

①细胞状态差,活力不好;

②肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系;

③小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠。

肿瘤长起来又消失?

肿瘤块先缩小,后变大很常见,很可能是炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收,继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来,长不起来建议换鼠。

肿瘤均一性很差,体积差距较大? 

如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大,可能因小鼠个体差异导致,建议重新分组。  

是否可以在一鼠进行多个点荷瘤? 

不可以,一只鼠只能接种一个点,若一只鼠身上有多个肿瘤块,可能会相互影响。

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