实验原理
通过不同的干预手段如脂多糖诱导、吸入性损伤、体外循环心脏手术等来模拟急性肺损伤的情况,使动物处于全身炎症反应状态,刺激机体释放炎性细胞因子,从而引起级联反应,使肺泡上皮细胞及血管内皮细胞受损,引起肺部病变。其中脂多糖模拟法应用更为广泛,目前比较常见的脂多糖诱导急性肺损伤模型制备方法有三种,腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),气管滴注LPS和盲肠结扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)诱导,本文采用腹腔注射脂多糖法制备。
实验准备
实验动物选择:品类:SD大鼠 性别:雌雄各半 体重:220~300g
实验试剂及仪器设备:脂多糖、肺部液体定量雾化器、酶标仪、电子天平等
操作步骤
制备周期:1周,根据实验需求调整
实验分组:随机分组法,分为正常组、实验组、恢复组
制备方法:适应性饲养1周后,正常组给予生理盐水腹腔注射,其余各组腹腔注射联合气道内雾化脂多糖诱导ALI 模型,造模后约 2 -3h 大鼠逐渐出现高热,呼吸急促等表现,造模成功。
后续实验
1.造模后,正常组、实验组采用生理盐水灌胃;恢复组给予地塞米松溶液灌胃,分别于 LPS 注射后 0、8、16 h 给药,共 3 次。
2.LPS 造模 24 h 后,大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉,处死后收集肺组织、血清等样本。肺组织以 4% 多聚甲醛固定,用于组织学检测。
检测研究评价
HE检测:可在低倍镜下观察到肺组织的炎症细胞浸润、水肿以及损伤,评估肺部损伤分布情况。
免疫组化检测:检测肺组织中炎症因子表达情况以及关注的重点信号通路基因表达情况;
WB检测:肺组织中关注的重点信号通路基因表达情况;
ELISA检测:血清中炎症因子的表达情况。