服务介绍:
人源细胞接种到裸鼠皮下,成瘤后以此为模型进行疾病发生机制和药物筛选的研究。目前肿瘤化疗所应用的大多数药物,都经动物移植性肿瘤试验而被发现,因此裸鼠皮下瘤模型是筛选抗肿瘤新药中最常用的模型。
实验中心:江苏瀚江生物
实验动物选择:BALB/c-nu裸小鼠 ,随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加,一般采用4--6周龄的裸鼠,体重16-18g左右。
细胞状态:选择生长状态良好的细胞,处于对数生长期,密度达到80-90%左右。在收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
细胞处理:用胰酶消化细胞后,用预冷的PBS洗两遍,去除残余血清。然后用PBS或无血清培养基调整细胞浓度至1-5×10^7个细胞/ml。如有条件,可加入基质胶加速瘤块生成。
接种细胞:尽快将细胞接种到裸鼠皮下,半小时内完成。途中将细胞悬液放在冰上保持活性。种植部位选择血供丰富的区域,如腋窝中后部。
接种技巧:接种前充分吹散细胞悬液,防止细胞成团。针头在皮下进针约1cm深,左右滑动几次,以便细胞接种成团。
固定裸鼠:左手捏紧裸鼠颈背部皮肤,小拇指夹住尾巴。
肿瘤观察:接种后1-2周可观察到皮下肿块。根据肿瘤细胞特性和接种量,成瘤周期为1-2个月。肿瘤大小不宜超过2000mm³。
肿瘤测量:每周测量两次肿瘤大小,使用游标卡尺测量最长和最短部位。体积计算公式:V=1/2×a×b²(a为长轴,b为短轴)。
样本处理:皮下瘤取下后,一部分冻存于液氮中用于提取蛋白和RNA,另一部分用福尔马林固定用于免疫组化、免疫荧光等实验。